خبرون - نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ واري ٽيڪنالاجي جو تعارف

ⅠNucleic acidiتعارف

نيوڪليڪ ايسڊ ڊي آڪسائيريبونيوڪلڪ ايسڊ (ڊي اين اي) ۽ رائبونيوڪليڪ ايسڊ (آر اين اي) ۾ ورهايل آهي، جن مان آر اين اي رائبوسومل RNA(rRNA)، ميسينجر RNA(mRNA) ۽ منتقلي RNA(tRNA) ۾ ورهايل آهي ان جي مختلف ڪمن جي مطابق.ڊي اين اي بنيادي طور تي نيوڪليس، مائيٽوڪونڊريا ۽ ڪلوروفارم ۾ مرڪوز آهي، جڏهن ته آر اين اي بنيادي طور تي cytoplasm ۾ ورهايل آهي.جين اظهار جي مادي بنياد جي طور تي، نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ هڪ انتهائي اهم ڪردار ادا ڪري ٿو ماليڪيولر حياتيات جي تحقيق ۽ ڪلينڪل ماليڪيولر تشخيص ۾.نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جي ڪنسنٽريشن ۽ پاڪائي سڌو سنئون ايندڙ پي سي آر، ترتيب، ویکٹر جي تعمير، اينزيم هضم ۽ ٻين تجربن تي اثر انداز ٿيندي.

Ⅱ نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ ۽ صاف ڪرڻ جو طريقو

① فينول / ڪلوروفارم ڪڍڻ جو طريقو

Phenol/chloroform extraction DNA ڪڍڻ لاءِ هڪ ڪلاسيڪل طريقو آهي، جيڪو نموني جي علاج لاءِ خاص طور تي ٻه مختلف نامياتي سالوينٽس استعمال ڪندو آهي، پاڻيءَ جي مرحلي ۾ ڊي اين اي جي بنياد تي نيوڪليڪ ايسڊ کي ٽوڙڻ، نامياتي مرحلي ۾ لپڊس، ۽ ٻن مرحلن جي وچ ۾ پروٽين.اهو طريقو گهٽ قيمت، اعلي پاڪائي ۽ سٺو اثر جا فائدا آهن.نقصانات پيچيده آپريشن ۽ ڊگهو وقت آهن.

② Trizol طريقو

Trizol طريقو آر اين اي ڪڍڻ لاء هڪ ڪلاسيڪل طريقو آهي.ٽريزول جو طريقو ڪلوروفارم سان سينٽرفيوگريشن کان پوءِ آبي مرحلي ۽ نامياتي مرحلي ۾ ورهايو ويندو آهي، جنهن ۾ آر اين اي کي آبي مرحلي ۾ تحلیل ڪيو ويندو آهي، آبي مرحلي کي نئين اي پي ٽيوب ۾ منتقل ڪيو ويندو آهي، ورهاڱي کي آئوسوپروپنول شامل ڪرڻ کان پوءِ حاصل ڪيو ويندو آهي، ۽ پوءِ ايٿانول صاف ڪيو ويندو آهي.اهو طريقو جانورن جي ٽشوز، سيلز ۽ بيڪٽيريا مان آر اين اي ڪڍڻ لاءِ موزون آهي.

③ Centrifugal ڪالمن صاف ڪرڻ جو طريقو

سينٽرفيوج ڪالمن صاف ڪرڻ جو طريقو خاص سلڪون ميٽرڪس جذب ڪرڻ واري مواد ذريعي ڊي اين اي کي خاص طور تي جذب ڪري سگهي ٿو، جڏهن ته آر اين اي ۽ پروٽين آساني سان گذري سگهن ٿا، ۽ پوء نيوڪليڪ ايسڊ کي گڏ ڪرڻ لاء اعلي لوڻ گهٽ پي ايڇ استعمال ڪريو، گهٽ لوڻ هاء پي ايڇ ويليو ايليوشن کي الڳ ڪرڻ ۽ نيوڪليڪ ايسڊ کي صاف ڪرڻ لاء.فائدا اعلي صفائي ڪنسنٽريشن، اعلي استحڪام، نامياتي محلول جي ضرورت ناهي، ۽ گهٽ قيمت.نقصان اهو آهي ته ان کي سينٽرفيوج ڪرڻ جي ضرورت آهي قدم قدم سان، وڌيڪ آپريشن جا مرحلا.

④ مقناطيسي موتي جو طريقو

مقناطيسي موتي جو طريقو اهو آهي ته سيل ٽشو جي نموني کي ليسيٽ ذريعي ورهايو وڃي، نموني ۾ نيوڪليڪ ايسڊ کي آزاد ڪيو وڃي، ۽ پوءِ نيوڪلڪ ايسڊ ماليڪيولز خاص طور تي مقناطيسي مالا جي مٿاڇري تي جذب ڪيا ويندا آهن، جڏهن ته نجاست جهڙوڪ پروٽين ۽ شگرز ان ۾ رهجي ويندا آهن. مائع.سيل ٽشو جي ورهائڻ جي مرحلن ذريعي، مقناطيسي مالا کي نيوڪليڪ ايسڊ سان پابند ڪرڻ، نيوڪليڪ ايسڊ ڌوئڻ، نيوڪلڪ ايسڊ ايليوشن وغيره وغيره، خالص نيوڪلڪ ايسڊ آخرڪار حاصل ڪيو ويندو آهي.فائدا سادي آپريشن ۽ مختصر وقت جو استعمال آهن، بغير قدم سينٽرفيوگريشن جي ضرورت کان سواء.اهو گهٽ فني گهرجون ڪئي آهي ۽ خودڪار ۽ ڪاميٽي آپريشن جو احساس ڪري سگهو ٿا.مقناطيسي مالا ۽ نيوڪليڪ ايسڊ جو مخصوص ميلاپ ڪڍيل نيوڪليڪ ايسڊ کي اعلي ڪنسنٽريشن ۽ پاڪائي سان ٺاهيندو آهي.نقصان اهو آهي ته موجوده مارڪيٽ قيمت نسبتا مهانگو آهي.

⑤ ٻيا طريقا

مٿين چئن طريقن کان علاوه، اُبلندڙ ڪڪڙ، مرڪوز لوڻ جو طريقو، اينيونڪ ڊٽرجنٽ طريقو، الٽراسونڪ طريقو ۽ اينزيميٽڪ طريقو وغيره.

Ⅲ نيوڪليڪ ايسڊ ڪڍڻ جو قسم

Foregene وٽ دنيا جو معروف سڌو PCR پليٽ فارم آهي، ڊبل ڪالمن RNA Isolation پليٽ فارم (صرف DNA-on + RNA).مکيه شين ۾ شامل آهن ڊي اين اي / آر اين اي آئسوليشن ڪٽس، پي سي آر ۽ سڌو پي سي آر ريجنٽس ماليڪيولر ليب ريجنٽس سيريز.

① ڪل آر اين اي ڪڍڻ

ڪل آر اين اي ڪڍڻ جي نمونن ۾ رت، سيلز، جانورن جي ٽشوز، ٻوٽن، وائرس وغيره شامل آهن. ڪل آر اين اي جي اعلي پاڪائي ۽ اعلي ڪنسنٽريشن ڪل آر اين اي ڪڍڻ ذريعي حاصل ڪري سگهجي ٿي، جيڪا RT-PCR، چپ تجزيو، ويٽرو ترجمي ۾ استعمال ٿي سگهي ٿي، ماليڪيولر ڪلوننگ، ڊاٽ بلاٽ ۽ ٻيا تجربا.

اڳوڻن سان لاڳاپيلآر اين اي آئسوليشن ڪٽس

جانورن جي ڪل آر اين اي آئسوليشن کٽ--جلدي ۽ موثر طور تي مختلف جانورن جي بافتن مان اعلي پاڪائي ۽ اعلي معيار جي ڪل آر اين اي ڪڍيو.

Cell Total RNA Isolation Kit--11 منٽن ۾ مختلف ڪلچر ٿيل سيلز مان تمام گهڻي صاف ۽ اعليٰ معيار جي ڪل آر اين اي حاصل ڪري سگهجي ٿي.

پلانٽ ٽوٽل آر اين اي آئسوليشن کٽ--تيزيءَ سان ٻوٽن جي نمونن مان اعليٰ معيار جي ڪل آر اين اي کي گھٽ پولي سيڪرائڊ ۽ پوليفينول مواد سان ڪڍيو.

وائرل آر اين اي آئسوليشن کٽ- وائرل آر اين اي کي تيزيءَ سان الڳ ڪريو ۽ صاف ڪريو نمونن جهڙوڪ پلازما، سيرم، سيل فري باڊي فلوئڊس ۽ سيل ڪلچر سپرنٽنٽس.

② جينومڪ ڊي اين اي ڪڍڻ

جينومڪ ڊي اين اي ڪڍڻ جا نمونا شامل آهن مٽي، مٽي، رت، سيلز، جانورن جي بافتن، ٻوٽن، وائرس وغيره. جينومڪ ڊي اين اي ڪڍڻ کي استعمال ڪري سگهجي ٿو اينزيم هضم، ڊي اين اي لائبريري جي تعمير، پي سي آر، اينٽي باڊي تيار ڪرڻ، مغربي بلٽ هائبرڊائيزيشن تجزيو، جين چپ، اعلي - ذريعي پٽ جي ترتيب ۽ ٻيا تجربا.

اڳوڻن سان لاڳاپيلڊي اين اي آئسوليشن ڪٽس

جانورن جي ٽشو ڊي اين اي آئسوليشن کٽ- جينومڪ ڊي اين اي کي تيزيءَ سان ڪڍڻ ۽ صاف ڪرڻ ڪيترن ئي ذريعن کان، جهڙوڪ جانورن جي ٽشوز، سيلز وغيره.

بلڊ ڊي اين اي ميڊي کٽ (1-5ml)تيزيءَ سان اعليٰ معيار جي جينومڪ ڊي اين اي کي اينٽي ڪوگولٽيڊ رت (1-5ml) مان صاف ڪريو.

Buccal Swab/FTA ڪارڊ DNA Isolation Kit- جلدي صاف ڪريو اعلي معيار جي جينومڪ ڊي اين اي کي بڪيڪل سواب / ايف ٽي اي ڪارڊ جي نمونن مان.

پلانٽ ڊي اين اي آئسوليشن کٽ- جلدي صاف ڪريو ۽ ٻوٽن جي نمونن مان اعليٰ معيار جي جينومڪ ڊي اين اي حاصل ڪريو (بشمول پولي سيڪرائڊس ۽ پوليفينول پلانٽ جا نمونا)

③ Plasmid extraction

پلازميڊ سيلز ۾ هڪ قسم جو گول ننڍو ماليڪيول ڊي اين اي آهي، جيڪو ڊي اين اي جي ٻيهر ٺهڻ لاءِ هڪ عام ڪيريئر آهي.پلازميڊ ڪڍڻ جو طريقو اهو آهي ته آر اين اي کي هٽايو وڃي، پلازميڊ کي بيڪٽيريا جينومڪ ڊي اين اي کان الڳ ڪيو وڃي، ۽ نسبتا خالص پلازميڊ حاصل ڪرڻ لاءِ پروٽين ۽ ٻين نجاست کي ختم ڪيو وڃي.

جنرل پلازميڊ ميني کٽ- تيزيءَ سان تبديل ٿيل بيڪٽيريا مان اعليٰ معيار جي پلازمڊ ڊي اين اي کي صاف ڪريو معمولي ماليڪيولر حياتيات جي تجربن لاءِ جيئن ٽرانسفارميشن ۽ اينزائم هضم

④ ٻيا ڪڍڻ جا قسم، miRNA ڪڍڻ، وغيره.